อิมมูโนฟลูออเรสเซนซ์ทำอย่างไร?

2024 ผู้เขียน: Fiona Howard | [email protected]. แก้ไขล่าสุด: 2024-01-10 06:43

ต่อไปนี้คือภาพรวมของขั้นตอนต่างๆ ของโปรโตคอลการย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ทางอ้อม

1. การวางแผนการทดลองและการเตรียมตัวอย่าง …
2. การตรึงตัวอย่าง …
3. การซึมผ่านของเซลล์. …
4. ปิดกั้น. …
5. การฟักตัวแอนติบอดีปฐมภูมิ. …
6. การฟักตัวแอนติบอดีรอง. …
7. เคาน์เตอร์และติดตั้ง

คุณทำอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์อย่างไร

ฟักไข่ทั้งหมดที่อุณหภูมิห้อง

1. ล้างเซลล์สองครั้งแล้วใช้แหนบค่อยๆ วางแผ่นปิดโดยคว่ำเซลล์ลงในช่องทำความชื้น
2. แก้ไขด้วยฟอร์มาลดีไฮด์ 4% เป็นเวลา 10 นาทีแล้วล้าง 3 ×.
3. ทำให้ซึมผ่าน 0.1% TX-100/PBS เป็นเวลา 15-20 นาที แล้วล้าง 3 ×.

คุณใช้ immunofluorescence ในเซลล์อย่างไร

วิธีสร้างภูมิคุ้มกันสำหรับเซลล์ที่ยึดติด

1. เมล็ด 1–1.5 x10⁴ เซลล์ต่อหลุมของสไลด์ 4 ห้องในอาหารเลี้ยงเชื้อ 500 มล. ฟักไข่ที่อุณหภูมิ 37°C ที่ 5% CO_2.
2. 32–36 ชั่วโมงหลังการเพาะเลี้ยงเซลล์ นำอาหารเพาะเลี้ยงเซลล์ออกแล้วล้างเซลล์ 3 ครั้งโดยใช้ 1X PBS 500 µL

อิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ตัวอย่างคืออะไร

ตัวอย่างเช่น นักวิจัยอาจสร้าง แอนติบอดีหลักในแพะ ที่รู้จักแอนติเจนหลายตัว จากนั้นจึงใช้แอนติบอดีรองสำหรับกระต่ายที่รู้จักบริเวณคงที่ของแอนติบอดีต่อแพะ (" แอนติบอดีต่อต้านแพะ" ของกระต่าย).

การย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์มีประโยชน์อย่างไร

การย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ (IF) เป็นเทคนิค ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการวิจัยทางชีววิทยาและการวินิจฉัยทางคลินิก IF ใช้แอนติบอดีที่ติดฉลากเรืองแสงเพื่อตรวจหาแอนติเจนเป้าหมายที่เฉพาะเจาะจง ตามด้วยการถ่ายภาพ มันเป็นเทคนิคที่ตรงมาก เพราะคุณสามารถเห็นอะไรบางอย่างได้