ต่อไปนี้คือภาพรวมของขั้นตอนต่างๆ ของโปรโตคอลการย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ทางอ้อม
- การวางแผนการทดลองและการเตรียมตัวอย่าง …
- การตรึงตัวอย่าง …
- การซึมผ่านของเซลล์. …
- ปิดกั้น. …
- การฟักตัวแอนติบอดีปฐมภูมิ. …
- การฟักตัวแอนติบอดีรอง. …
- เคาน์เตอร์และติดตั้ง
คุณทำอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์อย่างไร
ฟักไข่ทั้งหมดที่อุณหภูมิห้อง
- ล้างเซลล์สองครั้งแล้วใช้แหนบค่อยๆ วางแผ่นปิดโดยคว่ำเซลล์ลงในช่องทำความชื้น
- แก้ไขด้วยฟอร์มาลดีไฮด์ 4% เป็นเวลา 10 นาทีแล้วล้าง 3 ×.
- ทำให้ซึมผ่าน 0.1% TX-100/PBS เป็นเวลา 15-20 นาที แล้วล้าง 3 ×.
คุณใช้ immunofluorescence ในเซลล์อย่างไร
วิธีสร้างภูมิคุ้มกันสำหรับเซลล์ที่ยึดติด
- เมล็ด 1–1.5 x104 เซลล์ต่อหลุมของสไลด์ 4 ห้องในอาหารเลี้ยงเชื้อ 500 มล. ฟักไข่ที่อุณหภูมิ 37°C ที่ 5% CO2.
- 32–36 ชั่วโมงหลังการเพาะเลี้ยงเซลล์ นำอาหารเพาะเลี้ยงเซลล์ออกแล้วล้างเซลล์ 3 ครั้งโดยใช้ 1X PBS 500 µL
อิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ตัวอย่างคืออะไร
ตัวอย่างเช่น นักวิจัยอาจสร้าง แอนติบอดีหลักในแพะ ที่รู้จักแอนติเจนหลายตัว จากนั้นจึงใช้แอนติบอดีรองสำหรับกระต่ายที่รู้จักบริเวณคงที่ของแอนติบอดีต่อแพะ (" แอนติบอดีต่อต้านแพะ" ของกระต่าย).
การย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์มีประโยชน์อย่างไร
การย้อมสีอิมมูโนฟลูออเรสเซนส์ (IF) เป็นเทคนิค ที่ใช้กันอย่างแพร่หลายในการวิจัยทางชีววิทยาและการวินิจฉัยทางคลินิก IF ใช้แอนติบอดีที่ติดฉลากเรืองแสงเพื่อตรวจหาแอนติเจนเป้าหมายที่เฉพาะเจาะจง ตามด้วยการถ่ายภาพ มันเป็นเทคนิคที่ตรงมาก เพราะคุณสามารถเห็นอะไรบางอย่างได้