หากโปรตีนของคุณมีขนาดไม่เท่ากันกับแอนติบอดี คุณสามารถแยกโปรตีนด้วย 0.1M glycine, pH2-3 แล้วแยกโปรตีนที่สนใจออกจากแอนติบอดีโดยใช้ SEC (เช่น superdex 200).
การชะโปรตีนคืออะไร
โปรตีนถูกชะด้วย การไล่ระดับของปริมาณตัวทำละลายอินทรีย์ที่เพิ่มขึ้น เช่น อะซิโตไนไทรล์ โปรตีนจะชะตัวตามความไม่ชอบน้ำของพวกมัน หลังจากการทำให้บริสุทธิ์โดย HPLC โปรตีนจะอยู่ในสารละลายที่มีเพียงสารประกอบระเหยง่าย และสามารถถูกทำให้แห้งได้ง่าย
ทำไมโปรตีนจึงมีการชะ pH ต่ำ
การใช้บัฟเฟอร์ pH ต่ำสำหรับตัวชะจากโปรตีน A คือ ที่รู้กันว่ามีส่วนทำให้การรวมตัวของผลิตภัณฑ์ กระนั้น หลักฐานชุดหนึ่งที่จำกัดมากขึ้นแสดงให้เห็นว่า pH ต่ำอาจไม่ใช่เพียงสิ่งเดียว สาเหตุของการรวมกลุ่มในโปรตีน A โครมาโตกราฟี ในทางกลับกัน แง่มุมอื่นๆ ของกระบวนการอาจมีส่วนสนับสนุนอย่างมีนัยสำคัญ
การชะทำอย่างไร
ในเคมีเชิงวิเคราะห์และเคมีอินทรีย์ การชะเป็นกระบวนการของ การแยกวัสดุหนึ่งจากอีกวัสดุหนึ่งโดยการล้างด้วยตัวทำละลาย; เช่นเดียวกับการล้างเรซินแลกเปลี่ยนไอออนที่บรรจุเพื่อขจัดไอออนที่จับตัว … หลังจากที่โมเลกุลตัวทำละลายแทนที่สารที่วิเคราะห์ สารที่วิเคราะห์สามารถดำเนินการจากคอลัมน์เพื่อทำการวิเคราะห์ได้
คุณต้องการแอนติบอดี้กี่ตัวสำหรับ Coip
สำหรับการทดลอง Co-IP ตามปกติ แอนติบอดีที่ฉันใช้คือ ไม่เกิน 2ug (ในชุดของฉัน แอนติบอดี 1.4 -2.0ug เพียงพอสำหรับการจับ 2500-5000ug ของ โปรตีนไลเซท) แต่ก็ยังขึ้นอยู่กับระดับการแสดงออกของโปรตีนเป้าหมายในตัวอย่างของคุณ ดังนั้นคุณอาจต้องทำการปรับเปลี่ยนบางอย่าง
