วิธีที่ดีที่สุดในการแยกคลอโรพลาสต์ออกจากบัฟเฟอร์คืออะไร?

2024 ผู้เขียน: Fiona Howard | [email protected]. แก้ไขล่าสุด: 2024-01-10 06:43

เพื่อให้สามารถดึงเม็ดสีออกมาได้คลอโรพลาสต์จะถูกระงับในบัฟเฟอร์สำหรับการแยก เพื่อให้สามารถดึงเม็ดสีออกจากคลอโรพลาสต์ได้ เราต้องกำจัดบัฟเฟอร์ออกก่อน วิธีที่ดีที่สุดในการแยกคลอโรพลาสต์ออกจากบัฟเฟอร์คืออะไร? ใช้เครื่องปั่นแยกเพื่อแยก

คุณแยกคลอโรพลาสต์อย่างไร

ในวิธีแยกคลอโรพลาสต์ ผนังเซลล์แตกโดยใช้เครื่องผสมหรือโฮโมจีไนเซอร์ จากนั้นเนื้อเยื่อใบที่ยังไม่แตกและเศษเซลล์จะถูกลบออกโดยการกรอง คลอโรพลาสต์จะถูกรวบรวมโดยการหมุนเหวี่ยงโดยใช้การไล่ระดับเพอร์คอล

ทำบัฟเฟอร์แยกคลอโรพลาสต์อย่างไร

เตรียมปริมาณที่ต้องการของ 1X Chloroplast Isolation buffer โดย เจือจาง 2X buffer stock 1:1 ด้วยน้ำ dH2O เพิ่ม 10 µL ของสารละลาย BSA 10% ต่อ 1 มล. ของ 1X Chloroplast บัฟเฟอร์การแยก ก่อนใช้ ให้เติม DTT 1 ไมโครลิตร ต่อคลอโรพลาสต์ไอโซเลชั่นบัฟเฟอร์ 1 มล. ติดป้ายกำกับบัฟเฟอร์นี้ว่า 'Complete Buffer'

อะไรอยู่ในบัฟเฟอร์แยกคลอโรพลาสต์

DNA บัฟเฟอร์สำหรับการแยกประกอบด้วย 100 mM NaCl, 100 mM Tris-HCl (pH 8.0), 50 mM EDTA และ 1 mM DTT คลอโรพลาสต์ไลส์ได้มาจากการฟัก เม็ดคลอโรพลาสต์ที่มีบัฟเฟอร์การแยกดีเอ็นเอ 8 มล., SDS 20% 1.5 มล., 2-เมอร์แคปโตเอธานอล 20 µl และโปรตีนเนส K 30 µl (10 มก./มล.) ลงในหลอดปั่นแยกที่อุณหภูมิ 55 องศาเซลเซียส เป็นเวลา 4 ชั่วโมง

ค่า pH ของบัฟเฟอร์ที่ใช้ในการทำให้ใบผักโขมเป็นเนื้อเดียวกันในโปรโตคอลการแยกคลอโรพลาสต์คือเท่าใด

ผักโขมมีคลอโรพลาสต์ที่ดีและแยกออกได้ง่าย คุณจะต้องใส่ใบในเครื่องปั่นเย็นที่มีบัฟเฟอร์ฟอสเฟต 0.1 โมลาร์ pH 7.5 และน้ำตาลซูโครส 0.5 โมลเพื่อกันไม่ให้แตก