เก็บความเย็นไว้! กระบวนการสร้างเซลล์ที่มีความสามารถมีความท้าทายเนื่องจากต้องการให้เซลล์เย็นอยู่เสมอ สิ่งนี้สำคัญมากเพราะว่าเซลล์นั้น อ่อนไหวและเปราะบางมากในขณะที่พวกมันกำลังถูกทำให้มีความสามารถ การรักษาอุณหภูมิให้ต่ำจะช่วยไม่ให้เซลล์ตายระหว่างการประมวลผล
ทำไมปฏิกิริยาจึงถูกเก็บไว้บนน้ำแข็งระหว่างการทดลองแปลงร่าง
จากนั้นผสมพลาสมิด-เซลล์จะถูกให้ความร้อนชั่วครู่ที่ 45–50°C ทำให้ DNA เข้าสู่เซลล์ผ่านเมมเบรนที่กระจัดกระจาย จากนั้นนำส่วนผสมที่อุ่นแล้ววางบนน้ำแข็ง เพื่อเก็บพลาสมิดไว้ในแบคทีเรีย … หากสารละลาย DNA พลาสมิดมีเกลือมากเกินไป อาจเกิดประกายไฟได้ ซึ่งส่งผลต่อการเปลี่ยนแปลง
วางหลอดน้ำแข็งทำไม
ทำไมถึงคิดว่าเราเอาหลอดไปแช่น้ำแข็ง? ในการนำ DNA เข้าไปในแบคทีเรีย เราต้องเจาะรูพวกมันด้วยสารเคมีแคลเซียมคลอไรด์ (CaCl2) … รูที่เจาะเพื่อให้ DNA ในนั้นทำให้แบคทีเรียรั่วไหล ถ้าเราไม่แช่น้ำแข็งพวกมันจะ 'เลือดออก' จนตาย
บทบาทของแคลเซียมคลอไรด์เย็นจัดในการเตรียมเซลล์ที่มีความสามารถคืออะไร
กระบวนการเปลี่ยนสภาพด้วยความร้อนด้วยแคลเซียมคลอไรด์กระตุ้นให้เซลล์แบคทีเรียดูดซับ DNA จากสภาพแวดล้อมโดยรอบ … สารละลาย CaCl2 ที่เย็นจัด อำนวยความสะดวกในการจับ DNA กับพื้นผิวเซลล์ ซึ่งจะเข้าสู่เซลล์หลังจากเกิดความร้อนช็อกในช่วงเวลาสั้นๆ (3)
คุณเก็บเซลล์ที่มีความสามารถอย่างไร
เซลล์ที่มีความสามารถควรเก็บไว้ที่ - 80°C. การจัดเก็บที่อุณหภูมิ -20°C จะส่งผลให้ประสิทธิภาพการแปลงสภาพ (TE) ลดลงอย่างมีนัยสำคัญ เมื่อทดสอบกับ NEB 5-alpha Competent E. coli (NEB C2987H) เซลล์สูญเสีย TE 94.5% หลังจากเก็บรักษาเพียง 24 ชั่วโมงที่อุณหภูมิ -20°C